Этот вариант анализа основан на конкуренции меченых (конъюгат) и неме­ченых (исследуемых) антител за связывание с антигеном, адсорбированным на твердой фазе. Количество фермента, присоединившегося к твердой фазе, уменьшится пропорционально содержанию в смеси свободных антител. Для оп­ределения антигена используется тот же вариант, но в этом случае искомый ан­тиген конкурирует с меченым, стандартным антигеном за связывание с антите­лами, иммобилизованными на поверхности твердой фазы.

Конкурентный метод требует минимального числа операций, незначительно­го расхода реагентов и легко может бытъ автоматизирован. При проведении конкурентного ИФА для выявления антител лучше использовать меченые мо­ноклинальные антитела, тогда конкуренция конъюгата с исследуемым образцом происходит за единственный эпитоп адсорбированного на твердой фазе антиге­на. Этот вариант ИФА применяется для определения различных соединений, таких как иммуноглобулины человека, раково-эмбриональный антиген, инсулин и др. Он позволяет выявлять антитела к диагностически значимым эпитопам инфекционных агентов.

Основные этапы анализа для выявления антигена (рис.5):

1. На твердой фазе иммобилизуют специфические для выявляемого антигена моноклональные антитела.

2. В лунки панелей вносят в известной концентрации антиген, меченный фер­ментом, и исследуемый образец. Проводят инкубацию и отмывку. Параллельно в соседних лунках ставят положительный и отрицательный контроли. Для по­строения калибровки используют стандартный немеченый антиген в различных разведениях.

3. Добавляют субстрат, инкубируют, останавливают реакцию при развитии оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем.

4. Учет реакции на ИФА-ридере.

В этом случае количество антигена в исследуемом образце обратно пропор­ционально ферментативной активности на твердой фазе.

Смотрите также

Заключение
Веками фармацевтическая наука разрабатывала принципы и каноны наружного лечения. Причиной тому, является то, что наружный способ применения лекарств с пластично-упруго-вязкой дисперсионной средой ( ...

Реформы прочих служб (гериатрической, сельских амбулаторий)
            …Надо подчеркнуть, что с точки зрения существующей практики управления здравоохранением многие методические рекомендации авторов реформ выглядят разумно. Наверное, за это надо благодар ...

Интересы для медицины
Рисунок 1. Методы трансдермальной доставки лекарств. Рисунок из (4). Методы трансдермальной доставки, применяемые в данное время: а)      Извилистый» путь трансде ...







www.medicinformer.ru - Copyright © - 2019