Антигены, определяемые с помощью данного варианта ИФА, должны иметь несколько эпитопов, способных связывать антитела, или обладать повто­ряющимися, пространственно разделенными эпитопами одинаковой специфич­ности.

При проведении этого варианта ИФА высокоспецифичные поли- или моноклональные антитела, адсорбированные на твердой фазе, инкубируют с иссле­дуемым образцом. После процедуры отмывания в лунки вносят меченные фер­ментом антитела (конъюгат) к тому же антигену и далее проводят все осталь­ные этапы реакции. Эффективность образования специфического комплекса на каждой стадии анализа зависит от константы связывания реакции антиген-антитело.

Основные этапы анализа:

1. На твердой фазе иммобилизуют моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела.

2. В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положи­тельный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различ­ных разведениях. Инкубируют и отмывают.

3. В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела – конъюгат. После инкубации проводят отмывку.

4. Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении опти­мального окрашивания в лунках с положительным контролем.

5. Учет результатов на ИФА-ридере.

Основным достоинством метода является высокая чувствительность, пре­восходящая возможности других схем ИФА (рис.4).

Рисунок 3. Непрямой ИФА для выявления антител.

Смотрите также

Заключение
Подробно рассмотрев известные способы идентификации различных микроорганизмов, можно сделать вывод, что в основном это длительный и трудоемкий процесс, требующий достаточного набора знаний, оборудо ...

Заключение
Курортно-рекреационный и туристский комплекс Крыма – это совокупность связанных между собой отраслей и предприятий хозяйственного комплекса, объединенных общей целью – круглогодичное использование к ...

Медицинская сестра первичного звена в центре внимания приоритетного национального проекта Здоровье
Приоритетные национальные проекты, которые реализует сейчас наша страна, касаются каждого из нас, жителей России. Достойное жилье, качественное образование, доступное медицинское обслужи ...







www.medicinformer.ru - Copyright © - 2019