Антигены, определяемые с помощью данного варианта ИФА, должны иметь несколько эпитопов, способных связывать антитела, или обладать повто­ряющимися, пространственно разделенными эпитопами одинаковой специфич­ности.

При проведении этого варианта ИФА высокоспецифичные поли- или моноклональные антитела, адсорбированные на твердой фазе, инкубируют с иссле­дуемым образцом. После процедуры отмывания в лунки вносят меченные фер­ментом антитела (конъюгат) к тому же антигену и далее проводят все осталь­ные этапы реакции. Эффективность образования специфического комплекса на каждой стадии анализа зависит от константы связывания реакции антиген-антитело.

Основные этапы анализа:

1. На твердой фазе иммобилизуют моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела.

2. В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положи­тельный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различ­ных разведениях. Инкубируют и отмывают.

3. В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела – конъюгат. После инкубации проводят отмывку.

4. Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении опти­мального окрашивания в лунках с положительным контролем.

5. Учет результатов на ИФА-ридере.

Основным достоинством метода является высокая чувствительность, пре­восходящая возможности других схем ИФА (рис.4).

Рисунок 3. Непрямой ИФА для выявления антител.

Смотрите также

Хронический холецистит
Хронический холецистит- это хроническое воспаление желчного пузыря. Может возникнуть после острого холецистита, но чаще развивается самостоятельно, постепенно. Возникновению хронического холецистит ...

Депрессивная фаза маниакально-депрессивного психоза
Маниакально-депрессивный психоз (МДП) или биполярное аффективное расстройство (БАР) - заболевание, протекающее в форме депрессивных и маниакальных фаз (приступов), в промежутках между котор ...

Наркомания и токсикомания. Причины. Последствия. Уголовная ответственность
Введение Наркомания — хроническое прогредиентное заболевание, вызванное употреблением веществ-наркотиков, характеризующееся фазным течением и наличием в своей структуре нескольких поэтапн ...







www.medicinformer.ru - Copyright © - 2019