Эксклюзивные материалы студентам Рефераты, курсовые, дипломные
В этом варианте ИФА антиген, присутствующий в исследуемом образце, связывается с моноклональными антителами, меченными ферментной меткой, и ингибирует их взаимодействие со стандартным антигеном, иммобилизованным на твердой фазе. Присутствие в образце даже следовых количеств специфичного к конъюгату антигена будет ингибировать связывание меченых антител с иммобилизованным антигеном. Степень ингибирования прямо пропорциональна содержанию антигена в растворе. Для проведения количественного анализа строят кали6ровочную кривую с помощью последовательных разведений стандартного антигена. Основные этапы ингибиторного ИФА для выявления антигена (рис.6).
1. В лунках панелей адсорбируют стандартный антиген. Подбирают рабочее разведение меченых антител с помощью титрования.
Рисунок 4. «Сэндвич»- вариант ИФА.
Рисунок 5. Конкурентный ИФА Рисунок 6. Ингибиторный ИФА
2. Проводят предварительную инкубацию конъюгата в разведении, предшествующем рабочему, с разведениями исследуемого образца, стандартного антигена и положительных контрольных проб.
3. Смесь переносят в лунки панелей. Для контроля 100%-ного связывания в несколько лунок вносят только меченые антитела, без ингибирующего антигена. Панели инкубируют, затем проводят отмывку.
4. Добавляют субстрат.
5. Проводят учет результатов.
Концентрация определяемого антигена в исследуемом образце обратно пропорциональна ферментативной активности на твердой фазе.
ИФА может использоваться не только для определения растворимого антигена или антитела, но и клеток, вырабатывающих различные белки.
Смотрите также
Офтальмологическая терминология
Длительный период становления офтальмологии как области
медицинского знания объясняет многообразие терминологии офтальмологии и
многообразие способов терминообразования.
Офтальмологичес ...
Система здравоохранения РФ в настоящее время
…Отечественное здравоохранение строится на следующих основных
принципах:
• доступность медико-социальной помощи;
• ответственность органов государственной власти и
управления, пр ...
Системная красная волчанка
1.
Системная
красная волчанка (СКВ,
болезнь Либмана-Сакса) (лат.
system lupus erythematosis) — симптомы, прогноз,
лечение
Системная
красная волчанка -
диффузное заболевание ...