В 1983 году адаптировали технологию твердофазного ИФА для определения лимфоидных клеток, секретирующих антитела или антигены (например, цитокины), in vitro. Метод получил название ELISPOT (метод иммуноферментных зон или пятен). Основной принцип метода:

1. На поверхности полистироловой лунки (используют 24-х луночные панели для культивирования клеток) сорбируют антигены или антитела, которые слу­жат «ловушечными» реагентами. Текстильные стропы

2. Добавляют исследуемые лимфоидные клетки, культивируют несколько часов при 37°С, давая им возможность занять определенное место и выполнить секреторную функцию. Антитела или антигены, секретируемые такими клетками, улавливаются адсорбированными на твердой фазе реагентами.

3. Клетки удаляют, используя для этого отмывающий раствор с детергентом, лизирующим клетки.

4. Участки накопления секреторных продуктов проявляют, добавляя связанные с ферментом антитела (антиглобулиновый реагент).

5. Добавляют смесь субстрата с агарозой (используемые субстраты должны растворяться в агарозе и образовывать нерастворимые продукты реакции), на поверхности твердой фазы образуются коричневые или голубые пятна (в зави­симости от используемых ферментов и субстратов), выявляя участки, где распо­лагались клетки.

• Образовавшиеся пятна подсчитывают под микроскопом, это и будет количе­ство секретирующих клеток.

В качестве твердой фазы может быть использована нитроцеллюлозная мем­брана В этом случае есть ряд преимуществ: из-за высокой адсорбционной спо­собности НЦМ требуется значительно меньшее количество антигена, исполь­зуемого в качестве «ловушечного» реагента, кроме того, отпадает необходи­мость во включении агарозы в субстрат.

При параллельном определении количества секретирующих клеток и общего количества секретируемого антигена или антитела в лунке, что возможно при использовании другого субстрата, можно выявить количество секретируемого вещества единичной клеткой.

Данный метод нашел широкое применение для оценки количества клеток, секретирующих антиген, улавливаемый адсорбированными антителами, ис­пользуется для определения количества клеток, секретирующих цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИФН-у, ФНО-а).

Смотрите также

Антисептика
Антисептика - это комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направленных на уничтожение микробов в ране или в организме человека. Многие врачи древности независимо друг от друга пришли к в ...

Системная красная волчанка и уважение пациенткой наследия своего народа
  У другой пациентки Штефана Хаузнера, также уроженки Аргентины, в ходе проведенного интервью, была выявлена связь между отсутствием благословения на брак у бабушки пациентки и существующей ...

Первые упоминания об офтальмологии. Офтальмология древнего мира
Возникновение офтальмологии  вызывалось необходимостью лечения травм и облегчалось доступностью осмотра органа зрения. К числу первых средств лечения глазных травм относятся болеутоляющие. Так, инд ...







www.medicinformer.ru - Copyright © - 2018